我的PCR条带弥散,阴性对照也弥散,但是不加引物不弥散,当然也没有条带,请问都是什么原因啊?

黑_真t_md黑 1年前他留下的回答 已收到4个回答

submarine224 网友

该名网友总共回答了17个问题，此问答他的回答如下：采纳率：94.1%

阴性对照的作用就是来判断实验是否有污染的,如果PCR条带和阴性对照都弥散的话,原因应该是污染.污染一般有试剂的污染,也有可能是环境的污染.
先说试剂的污染.你设置的阴性对照所用的每一种试剂都存在被污染的可能,最实际也最麻烦的方法就是,每次更换一种试剂,重复实验,从而确定那种试剂发生污染.你提到的不加引物不弥散,那是必然的结果,及时所有试剂都发生了污染,不加入引物,扩增也是没办法进行的,结果也不会有条带.
再说环境的污染.环境的污染一般就是指气溶胶的污染,PCR实验室多少都会存在这种问题,气溶胶是比较难以消除的.先假设你所用的试剂都是正常的,你可以选择两到三对PCR产物片段较长的引物做试验（比你此次出问题的实验所选的要长）,进行正常PCR,电泳看结果是如何,如果不出现弥散现象,可初步判断为气溶胶污染.接着选两到三对产物片段较短的做实验（同上）,观察结果,如果同样出现弥散现象,此时可断定确实是气溶胶污染.
以上所说,属于理想状态,首先要排除个人操作失误,另外具体的情况再具体分析!
个人理解,

1年前他留下的回答 追问

9

黑_真t_md黑

我用同样的试剂换一对引物PCR，有清晰的条带，证明试剂没有问题。考虑你说的气溶胶污染，我换个地方再加样一次试试。有了结果再向你请教啊。非常感谢了。

liangshanshenke 网友

该名网友总共回答了6个问题，此问答他的回答如下：

是跑出的条带很糊么？如果是的话，按照你说的阴性对照也弥散应该是引物的问题，也有可能是PCR试剂的问题，还有可能是退火温度的问题。逐个排除吧。

1年前他留下的回答

1

纷纷机将 网友

该名网友总共回答了278个问题，此问答他的回答如下：

降低电压 跑慢点

1年前他留下的回答

1

linguosheng 网友

该名网友总共回答了224个问题，此问答他的回答如下：

引物有无污染，跑个电泳看看

1年前他留下的回答

1

　　以上就是小编为大家介绍的我的PCR条带弥散,阴性对照也弥散,但是不加引物不弥散,当然也没有条带,请问都是什么原因啊? 的全部内容，如果大家还对相关的内容感兴趣，请持续关注上海建站网！