大肠杆菌核酸的提取纯化、琼脂糖电泳鉴定与紫外分光法定量的实验中,如何防止核酸降解基因组DNA?

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gentle910 花朵

该名网友总共回答了21个问题，此问答他的回答如下：采纳率：100%

1、取培养至对数生长后期的含pBS质粒的细菌培养液250ml,4℃下5000g离心15分钟,弃上清,将离心管倒置使上清液全部流尽.
2、将细菌沉淀重新悬浮于50ml用冰预冷的STE中（此步可省略）.
3、同步骤1方法离心以收集细菌细胞.
4、将细菌沉淀物重新悬浮于5ml溶液I中,充分悬浮菌体细胞.
5、加入12ml新配制的溶液II,盖紧瓶盖,缓缓地颠倒离心管数次,以充分混匀内容物,冰浴10分钟.
6、加9ml用冰预冷的溶液III,摇动离心管数次以混匀内容物,冰上放置15分钟,此时应形成白色絮状沉淀.
7、4℃下5000g离心15分钟.
8、取上清液,加入50ml RNA酶A(10mg/ml),37℃水浴20分钟.
9、加入等体积的饱和酚/氯仿,振荡混匀,4℃下12000g离心10分钟.
10、取上层水相,加入等体积氯仿,振荡混匀,4℃下12000g离心10分钟.
11、取上层水相,加入1/5体积的4mol/L NaCl和10% PEG(分子量6000),冰上放置60分钟.
12、4℃下12000g离心15分钟,沉淀用数ml 70%冰冷乙醇洗涤,4℃下12000g离心5分钟.
13、真空抽干沉淀,溶于500ml TE或水中.
[注意] 1.提取过程中应尽量保持低温.
2.加入溶液II和溶液III后操作应混和,切忌剧烈振荡.
3.由于RNA酶A中常存在有DNA酶,利用RNA酶耐热的特性,使用时应先对该酶液进行热处理(80℃ 1小时),使DNA酶失活.

1年前他留下的回答

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