您好.我最近的PCR扩的产物成弥散状,但是能看见目的条带,这是怎么回事啊,我之前试条件时都没有弥散

您好.我最近的PCR扩的产物成弥散状,但是能看见目的条带,这是怎么回事啊,我之前试条件时都没有弥散
这样的产物酶切能切吗? weiyzlyg 1年前他留下的回答 已收到2个回答

永远微笑的罗密欧 春芽

该名网友总共回答了13个问题，此问答他的回答如下：采纳率：92.3%

可能性超多的
如果是同一个模版,同一个引物,同一条件的PCR,考虑模版/引物/buffer是否污染,引物是否时间比较久有降解.
Mg浓度/退火温度是否有改变?考虑降低Mg或者提高退火温度减少非特异扩增.
电泳缓冲液不干净也可能会使条带变难看.

1年前他留下的回答 追问

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weiyzlyg

是这样的，DNA不同（但别人扩的就没有拖带），酶，缓冲液都是新的。引物前天我扩的都很好（当时扩的很少，就几个样）。条件没变。

永远微笑的罗密欧

如果你再随机挑少量几个样品扩增：还有问题的话，建议你微调PCR的Mg或退火温度条件；如果少量样品没有问题，可能是你在做大量样品的时候时间比较长，引起降解或酶活性降低，注意一直在冰上操作哦。 可以直接割胶回收纯化之后酶切，如果你之后要连接载体作克隆的话，还是建议你再优化条件，单一条带最好。

LN983 网友

该名网友总共回答了25个问题，此问答他的回答如下：

电泳糟的一个电极极是不是有损坏

1年前他留下的回答

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