请问你做PCR之后出现弥散的带,现在解决了吗,怎么解决的?我用cDNA做模板,也出现这种情况.

hefengfeng2001 1年前他留下的回答 已收到2个回答

思过翻生 春芽

该名网友总共回答了19个问题，此问答他的回答如下：采纳率：84.2%

我也是用cDNA做模板的,没有出现过弥散带的情况,但经常出现非特异性条带.出现弥散带的原因可能是你在做凝胶电泳时电泳液被污染或者是做的胶有问题,也可能是你的cDNA部分降解了,至于降解的原因主要是由于时间和温度.扩增完的东西要立即进行电泳,其次电泳的室温不宜太高时间不要太长,一般最多半个小时左右.另外在扩增过程中,由于气候的缘故,部分PCR仪在室温超过30度后就不能正常工作了,这要看PCR仪的型号,其次是前期的RNA提取的效果不好,或者是提取的RNA已经出现降解导致cDNA模板质量受到影响.
最后要说一下关于PCR部分,PCR的体系和退火温度很重要,特别是镁离子的浓度,最好是用正交试验摸索出最好的体系,然后用温度梯度找到最适合的退火温度.因为设计的好不好也是重大问题之一啊,你先试试看吧!

1年前他留下的回答 追问

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hefengfeng2001

我又做了一次，相同条件，可是这次什么条带也没出现。我提的RNA用DNase处理过，然后检测，质量可以，有可能量有点少。一般你们PCR体系，10ul的话加多少模板？

纷纷机将 网友

该名网友总共回答了278个问题，此问答他的回答如下：

换一对引物

1年前他留下的回答

2

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