我想使目的基因过表达,实验应该如何进行?最好详细地讲一下步骤,多谢了!

mingyueyiyi 1年前他留下的回答 已收到5个回答

动星 网友

该名网友总共回答了22个问题，此问答他的回答如下：采纳率：90.9%

楼主的问题问的太宽泛了.请问你是具体问题出在哪里呢?
你可以利用Biomart这个工具（）,找到种间的orthlogue关系以及各种类型的注释ID直接的对应关系.你也可以用ncbi里面的homologene数据库去找种间的同源序列.
multiple alignment可以用clust W或者mega做.
系统发育树可以用mega做.PHYLIP好像也可以.
基因结构上可以做做gc含量,外显子大小,splicing,调控序列什么的
蛋白结构预测软件很多,不过我没做过.
ncbi有一个conserved domain 的数据库,你可以和他比较下,分析下结构域.
表达情况.你可以找找相关的EST（ncbi）或者array（.这个不记得了,在ncbi上应该有别人的数据）的表达数据.

1年前他留下的回答

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a0qt 网友

该名网友总共回答了1021个问题，此问答他的回答如下：

换一个强启动子试试

1年前他留下的回答

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啄树鸟 网友

该名网友总共回答了424个问题，此问答他的回答如下：

先找到目的基因，设计引物，PCR，构建克隆及表达载体，转入大肠杆菌做原核蛋白表达
如果大小正确 ，可以转入宿主真菌做真核表达

1年前他留下的回答

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扬萧 网友

该名网友总共回答了8个问题，此问答他的回答如下：

1、首先选择高拷贝的质粒载体；
2、将目的基因进行改造，尽量避免工程菌的稀有密码子，在表达质粒之前设置高效的启动子；
3、链接载体与目的基因
4、导入所选择的工程菌，进行培养
5、检测表达量
如果还是太低，你就要看看是否存在抑制物或负调控等...

1年前他留下的回答

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成电混混 网友

该名网友总共回答了3个问题，此问答他的回答如下：

你想让基因在哪里表达呢？可以换个载体，用温度或IPTG诱导。

1年前他留下的回答

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