PCR结果呈弥散状是什么原因造成的

PCR结果呈弥散状是什么原因造成的
我上个星期跑完PCR的产物跑琼脂糖凝胶电泳时,所有样都不出现条带,而是弥散状的,从投拖到尾,而maker却是好的,说明不是电泳的问题,我把所有的酶,buffer,Mg+都换了一遍了还是找不到原因,结果照旧,谁能告诉我这可能是什么原因造成的,小女子感激不尽 woailx1314 1年前他留下的回答 已收到7个回答

猴子救月是ss 网友

该名网友总共回答了12个问题，此问答他的回答如下：采纳率：100%

退火温度较低导致的非特异性扩增是造成你遇到问题的原因.你可以通过Touch Down PCR或者梯度PCR摸索最佳退火温度后重新进行PCR.

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传说中的超级用户 网友

该名网友总共回答了30个问题，此问答他的回答如下：

1 模板浓度太高了，结果模板不能很好地和引物结合而自结合了
2 镁离子浓度高了，可能buffer里含有镁离子，你又加了一遍
3 单纯的退火温度问题也许不会造成全部弥散，适当提高些就好，一般比推荐温度高2-3度就可以
4 也许你看到的根本就不是扩增产物，你的引物不合适
5 最好给出你目标片段的大小或是范围，再说下你的程序，大家好帮你看看
6 做个肯定能扩出来的...

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acemax 网友

该名网友总共回答了1个问题，此问答他的回答如下：

有杂质吧...

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别和ccx 网友

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毛吉杨说要升高TM温度，我就遇到过那样的问题，升了就好了

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sian33 网友

该名网友总共回答了1个问题，此问答他的回答如下：

跑完PCR后，产物最好是当天电泳。时间长了会降解。镁离子、dNTP等这些都会影响PCR结果的，退火温度也很重要，最好优化一下，找到最适退火温度。

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zhangrice 网友

该名网友总共回答了1个问题，此问答他的回答如下：

1.你的引物是不是特异性不高？
2.延伸时间够不够长，一般是1k--1min？
3.退火温度是否过低？
4.电泳的问题应该不大，重新换个模板试一下。

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wlw218 网友

该名网友总共回答了4个问题，此问答他的回答如下：

是不是提纯没有做好呢，你再提纯做一次试试，要是你的样品本来就有问题的话你在怎么做都是无用功

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