多酚氧化酶活性的计算和表示方法

niuniu1234 1年前他留下的回答 已收到1个回答

魏显爝 网友

该名网友总共回答了19个问题，此问答他的回答如下：采纳率：78.9%

常用检压法和分光光度法.前者应用多酚氧化酶(PPO)可催化儿茶素等底物在有氧条件下的氧化还原反应,根据底物的氧化速率与单位酶浓度和单位时间内的耗氧量成正比这一原理,用瓦氏呼吸仪测定反应过程中的耗氧量求得PPO活性的大小,此方法设备简便,但操作复杂,误差较大.后者利用邻苯二酚和D-儿茶素在PPO催化下生成有色产物.其显色物质在460纳米处有最大吸收,吸收值在单位时间内的变化和单位酶活性成正比,计算PPO活性强度.操作方法简便,重现性好.与检压法原理相似的方法有氧电极法,应用也较多.

1年前他留下的回答 追问

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niuniu1234

拜托，你仔细看题好不好，我问的是多酚氧化酶的计算和表示方法，测定方法不需要。你有提到计算PPO活性的大小，但是你能具体讲解一下吗？

魏显爝

也可以这样测定： 以L-DOPA为底物，参照Ashida(1971)的方法进行。将3ml,0.1mol/L,PH=6.0 的磷酸钾盐缓冲液与100ul的0.01mol/l的L-DOPA及100ul的血浆置于室温下混匀，每间隔2分钟读取在490nm波长处的光密度值一次。 酚氧化酶活力蛋白定义为： 以O.D.490nm对反应时间(min)作图，以实验条件下每分钟O.D.490nm增加0.001定义为一个酶活力单位。

niuniu1234

以反应时间作图，得出趋势线，拟合线性关系y=Kx+b，K就是PPO的变化速率。那一个酶活力单位是不是就是 K/0.001/酶液用量？求教

魏显爝

K/0.001就行 与酶液用量无关

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