提质粒时,基因组为什么不会同时被提出来?

提质粒时,基因组为什么不会同时被提出来?
在原核生物中,质粒和基因组都成环状,大小差不多.为什么我们通过碱法提取质粒只会得到质粒不会得到基因组? tortoisewang 1年前他留下的回答 已收到2个回答

n2awjs 网友

该名网友总共回答了16个问题，此问答他的回答如下：采纳率：93.8%

碱法提质粒时,溶液III加入后就会有大量的沉淀,但大部分人却不明白这沉淀的本质.最容易产生的误解是,当SDS碰到酸后发生的沉淀.如果你这样怀疑,往1%的SDS溶液中加如2M的醋酸溶液看看就知道不是这么回事了.大量沉淀的出现,显然与SDS的加入有关系.如果在溶液II中不加SDS会怎样呢,也会有少量的沉淀,但量上要少得多,显然是盐析和酸变*沉淀出来的蛋白质.既然SDS不是遇酸发生的沉淀,那会不会是遇盐发生的沉淀呢?在1％的SDS溶液中慢慢加入5 N的NaCl,你会发现SDS在高盐浓度下是会产生沉淀的.因此高浓度的盐导致了SDS的沉淀. 但如果你加入的不是NaCl而是KCl,你会发现沉淀的量要多的多.这其实是十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate）遇到钾离子后变成了十二烷基硫酸钾（potassium dodecylsulfate,PDS）,而PDS是水不溶的,因此发生了沉淀.如此看来,溶液III加入后的沉淀实际上是钾离子置换了SDS中的纳离子形成了不溶*的PDS,而高浓度的盐,使得沉淀更完全.大家知道SDS专门喜欢和蛋白质结合,平均两个氨基酸上结合一个SDS分子,钾钠离子置换所产生的大量沉淀自然就将绝大部分蛋白质沉淀了,让人高兴的是大肠杆菌的基因组DNA也一起被共沉淀了.这个过程不难想象,因为基因组DNA太长了,长长的DNA自然容易被PDS给共沉淀了,尽管SDS并不与DNA分子结合
50－100 kb大小的片断,没有办法再被PDS共沉淀了.所以碱处理的时间要短,而且不得激烈振荡,不然最后得到的质粒上总会有大量的基因组DNA混入,琼脂糖电泳可以观察到一条浓浓的总DNA条带.
一句话,长长的基因组DNA在加入溶液三后被PDS共沉淀了,而我们在这一步后的高速离心后去掉了沉淀,也就去除了基因组DNA.
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1年前他留下的回答

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啄树鸟 网友

该名网友总共回答了424个问题，此问答他的回答如下：

提取基因组DNA和质粒DNA的方法不相同啊，这大概是前人的经验，要不然不是混淆了？

1年前他留下的回答

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