菌液直接PCR我的pcr体系是50微升的,预变性时间5分钟,模板7微升,我接种单菌落到增菌液,以往都是煮沸了制模板然后p

菌液直接PCR
我的pcr体系是50微升的,预变性时间5分钟,模板7微升,我接种单菌落到增菌液,以往都是煮沸了制模板然后pcr鉴定是不是我要的细菌,听说可以用菌液直接pcr,不知道预变性时间该改为多少,菌液体积应加多少,其他还要做什么修改,做出来和煮模板做区别大吗? aiai513 1年前他留下的回答 已收到2个回答

不过如此so_whot 网友

该名网友总共回答了19个问题，此问答他的回答如下：采纳率：89.5%

其实你原体系中7微升都太多了.我做50微升体系最多加3微升模板.
菌液PCR只需要用枪头沾取菌落,或者加入2微升左右菌液即可.预变性时间可稍微延长.如果引物特异性好的话,和用DNA模板效果差不多.

1年前他留下的回答

2

ladycaicai 网友

该名网友总共回答了17个问题，此问答他的回答如下：

.
鉴定为目的的菌落PCR，我通常只用20μL体系，20μL体系就够了，不就是看个有没有嘛，多了浪费试剂。
20μL里面作为模版的菌液，我只加0.2~0.3μL（1%~1.5%，尽量减少对PCR体系的干扰，而且可以减小非特异性结合的发生）；如果是固体菌落，那更是微乎其微——事实上更少的体积都没问题，但是2.5μL的枪最小只能到0.2μL，0.1μL那是扯淡。
变性时间，如果...

1年前他留下的回答

1

　　以上就是小编为大家介绍的菌液直接PCR我的pcr体系是50微升的,预变性时间5分钟,模板7微升,我接种单菌落到增菌液,以往都是煮沸了制模板然后p 的全部内容，如果大家还对相关的内容感兴趣，请持续关注上海建站网！